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PCR這項(xiàng)技術(shù),被廣泛地運(yùn)用在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)室,PCR儀如今應(yīng)用的也是很廣泛,而PCR儀有著而不同的種類,今天君意生物就給大家介紹一下梯度PCR儀:

梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。PCR反應(yīng)能否成功,基因擴(kuò)增儀,退火溫度是關(guān)鍵,梯度PCR儀每個(gè)孔的溫度可以在規(guī)定范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置。
對(duì)于使用染料法的定量PCR反應(yīng),基因擴(kuò)增儀廠家,雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度(Tm值),但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差異會(huì)很大。

引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化,對(duì)于特殊片斷,經(jīng)驗(yàn)公式得到的數(shù)據(jù)不一定能得出準(zhǔn)確的結(jié)果,退火溫度細(xì)微的差異對(duì)結(jié)果都可能產(chǎn)生決定性的影響,因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問(wèn)題。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問(wèn)題——在反應(yīng)過(guò)程中每個(gè)孔的溫度控制條件可以在指l定范圍內(nèi)按照梯度變化,熒光定量基因擴(kuò)增儀,根據(jù)結(jié)果,一步就可以摸索出最適合的反應(yīng)條件。
不單退火溫度,連變性溫度和延伸溫度都可以優(yōu)化——對(duì)于多種聚合酶混合酶擴(kuò)增如Invitrogen、Clontech、Promega的多數(shù)高保真Taq酶來(lái)說(shuō)這個(gè)非常重要,因?yàn)門aq和校正酶的最l佳反應(yīng)溫度可能有顯著差異,優(yōu)化延伸溫度就顯得很重要。

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