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單分散無孔微球由于粒徑均一,粒徑大小精l確可控,因此把單分散無孔微球填充在層析柱中,其球與球之間形成的空隙大小及形狀是可控的。這種空隙大小是由單分散聚合物微球大小決定的,微球越小,間隙越小,因此層析柱的孔隙可以通過改變無孔微球粒徑大小來進行精l確調(diào)節(jié)。納微已開發(fā)出世l界領(lǐng)l先的微球精準制造技術(shù),該技術(shù)可以對微球大小,均勻性進行前l所未有的精準控制。利用該技術(shù)優(yōu)勢納微開發(fā)出病毒的單分散無孔聚合物層析介質(zhì),由于層析柱孔隙大小可控、耐壓性好、柱床穩(wěn)定、柱效高、分辨率高等優(yōu)點,因此可以顯著提高病毒的純化效率,大幅度提升病毒的純度。這種方法非常適用實驗室分離純化病毒樣品,但該方法使用的是實心球,因此比表面積低,病毒吸附載量低,不適合大規(guī)模分離純化病毒或類病毒(疫l苗)。
以純化溶瘤病毒為例,由于其在生產(chǎn)過程中存在宿主蛋白等雜質(zhì),純化前 SEC測試純度為6.5%。純化采用兩種基質(zhì)相同的介質(zhì),其表面化學功能也很一致,主要區(qū)別是前者是無孔實心的層析介質(zhì),而后者是傳統(tǒng)的多孔層析介質(zhì)。層析純化的方法是陰離子交換吸附然后梯度洗脫(Bind-elute)模式。從層析圖譜可以看出,在洗脫及CIP過程中無孔介質(zhì)洗脫雜質(zhì)更小,峰值更低,疏水層析介質(zhì),意味著上樣過程中結(jié)合的雜質(zhì)會更少,Protein A 介質(zhì),有利于表面結(jié)合的病毒分子純化。通過對層析洗脫液SEC純度分析比較,發(fā)現(xiàn)用傳統(tǒng)的多孔層析介質(zhì)實驗得到的病毒樣品純度為54%(圖 ),而用無孔的同類型介質(zhì)實驗得到的病毒純度達到接近90%(圖 )。


