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RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,Twisp Liquid Exo代理,反應(yīng)溫度在37°C左右。

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核酸提取技術(shù)亦可分為2部分,<樣本裂解>與<核酸純化>,目前市面上常見(jiàn)的樣本裂解技術(shù)有<物理加熱裂解>、<蛋白酶K裂解>、<一步法核酸提取>,核酸純化技術(shù)有<梯度離心法>、<硅膠模柱法>、<磁珠法>。

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重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng) DNA合成,對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的 DNA鏈與SSB結(jié)合,防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中,由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。


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