MLO-Y4復(fù)蘇細(xì)胞系

MLO-Y4復(fù)蘇細(xì)胞系 "


造成實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞污染常見(jiàn)情況總結(jié)：
細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)污染的是、和支原體污染。細(xì)胞一旦污染，大多數(shù)較難處理。那么，哪些情況我們不注意的話就會(huì)造成細(xì)胞污染呢？我們根據(jù)常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析總結(jié)下。
違規(guī)操作：1. 為節(jié)省時(shí)間，有人已經(jīng)用超凈臺(tái)四個(gè)多小時(shí)，不開(kāi)紫外30min,酒精擦拭后直接開(kāi)始試驗(yàn)。2. 器材或者溶液很久沒(méi)用，未檢測(cè)是否污染而直接使用；離心管多次使用，頭為了方便交叉使用。3. 超凈臺(tái)不點(diǎn)酒精燈；點(diǎn)了酒精燈放在右上角，而你在左下角做試驗(yàn)。4. 不帶手套，徒手操作。5. 細(xì)胞培養(yǎng)間配備式移液器、手術(shù)器械、離心機(jī)、冰箱等儀器設(shè)備以及的實(shí)驗(yàn)服和拖鞋，未定期消。物品被帶出細(xì)胞房使用。培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中使用的所有實(shí)驗(yàn)用具，如移液管、一次性頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求使用（通常需121°C高壓20分鐘后37％烤干備用）。
超凈臺(tái)和桌面，東西太多太亂：超凈臺(tái)不是儲(chǔ)物箱，什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、頭就不要堆在超凈臺(tái)！這樣就會(huì)有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。細(xì)胞房其他的桌面，切忌東西堆積如山，不要將酒精棉球、標(biāo)簽紙、牛皮紙買來(lái)后全部堆在細(xì)胞房！一不小心“飄”進(jìn)你的細(xì)胞培養(yǎng)板里，細(xì)胞就會(huì)養(yǎng)的不好，啥時(shí)候死了都不知道！
培養(yǎng)箱太久沒(méi)清潔：細(xì)胞污染了，并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了，首先你還得看看這個(gè)恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細(xì)胞是否污染，如果有而且好幾個(gè)板子都有類似的污染塊，那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了，得給培養(yǎng)箱做個(gè)大掃除，重新酒精消，照紫外；孵箱里的水，水沒(méi)了要記得加，還得記得十天半個(gè)月的就用酒精擦擦托盤。
細(xì)胞房人多口雜，難管理：在細(xì)胞房這種衛(wèi)生要求高，人多了，不確定因素多了，難以保證試驗(yàn)在無(wú)菌條件下操作。出入試驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)服當(dāng)風(fēng)衣穿，不扣紐扣，不戴鞋套，就容易造成細(xì)胞污染；超凈臺(tái)做實(shí)驗(yàn)時(shí)，喜歡說(shuō)話聊著做試驗(yàn)，要是還不帶口罩，里面就有很多等著去攻擊你的細(xì)胞呢！" "


幾種實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)基成分的作用：
1.NCO3的作用是什么？與CO2一起形成緩沖系統(tǒng)，保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。
2.酸鈉的作用是什么？酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒(méi)有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝酸鈉。
酸鈉的貯存液濃度一般為50mM，-20℃保存，培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.
3.加入HEPES有何好處？培養(yǎng)基中最常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營(yíng)養(yǎng)，但卻在生理PH值條件下會(huì)降低緩沖能力。而HEPES是一種很強(qiáng)的Buffer，加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng)。Hepes的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培養(yǎng)基中。
4.酚紅的作用是什么？酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。
5.谷氨酰胺的作用是什么？幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺都有膠高的要求。谷氨酰胺脫掉后，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20℃冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。
試驗(yàn)操作中常配制高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支），分裝使用，-20℃保存。使用時(shí)，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培養(yǎng)基中，使其終濃度為2mM培養(yǎng)基。" "


實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié)：
培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)中不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分，但是最基礎(chǔ)的培養(yǎng)基卻給實(shí)驗(yàn)者帶來(lái)了一系列的問(wèn)題。別小看細(xì)胞培養(yǎng)，這里可蘊(yùn)含著大大的學(xué)問(wèn)。有時(shí)候細(xì)胞狀態(tài)不好，接下來(lái)的一系列實(shí)驗(yàn)根本就沒(méi)法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多，那就先從培養(yǎng)基開(kāi)始說(shuō)起。
培養(yǎng)基常見(jiàn)問(wèn)題：
1.怎樣查到一個(gè)特定細(xì)胞株的相關(guān)知識(shí)和培養(yǎng)條件？ATCC、Z、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外大學(xué)細(xì)胞庫(kù)收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來(lái)源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。
2.液體培養(yǎng)基可以放-20℃保存嗎？不可以！因?yàn)樵?20℃下，培養(yǎng)基中的鹽容易析出，培養(yǎng)基融化后，有的鹽可能無(wú)法重新溶解，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓降低，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞容易破裂而死亡。
3.自己新配制的液體培養(yǎng)基能保存多久？我們建議將新配制的培養(yǎng)基放置于4℃，避光保存盡量在一周內(nèi)使用完畢。培養(yǎng)基越新鮮越好。
4.培養(yǎng)基中添加了血清和后，可長(zhǎng)期保存嗎？一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┖脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。
5.培養(yǎng)基中是否須添加？除了特殊篩選系統(tǒng)外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何。為防止、污染，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml。
6.為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色，且pH值越來(lái)越偏堿性？培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果， 將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO2，以調(diào)整pH值。
7.培養(yǎng)液pH是怎樣影響細(xì)胞生長(zhǎng)的？由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)PH值要求也不完全相同，原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對(duì)PH值變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來(lái)說(shuō)，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此，配制培養(yǎng)用液時(shí)可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.1um或0.2um濾膜過(guò)濾時(shí)，PH值會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
8.培養(yǎng)液滲透壓是怎樣影響細(xì)胞生長(zhǎng)的？當(dāng)細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境的分子濃度不同時(shí)就會(huì)產(chǎn)生滲透壓。這種情況下，水分通過(guò)滲透流入或流出細(xì)胞，從而改變細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境。高滲透壓迫使水分從細(xì)胞中擴(kuò)散出來(lái)導(dǎo)致細(xì)胞收縮，這種情況會(huì)使DNA和蛋白遭到破壞，細(xì)胞周期停滯以及最終使細(xì)胞死亡；反之，低滲透壓使水分流入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞腫脹破裂。
9.為什么液體培養(yǎng)基1640有時(shí)候顏色發(fā)黃，是pH值不對(duì)嗎？不是。因?yàn)榕浞皆颍?640為堿酚紅型，其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一，所以是因?yàn)榉蛹t濃度低，而非PH值低。
10.為什么有客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅？研究表明，酚紅可以模擬固類的作用（特別是雌）。為避免固類反應(yīng)，細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè)，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加酚紅的培養(yǎng)基。" "


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C4307 SW-13細(xì)胞株
C1248 SW1271細(xì)胞株
C1247 SW1222細(xì)胞株
C1246 SW116細(xì)胞株
C3038 SW1116細(xì)胞株
C1244 SW1088細(xì)胞株
C1243 SW038-C2細(xì)胞株
C1929 SW 982細(xì)胞株
C4234 SW 900[SW-900; SW900]細(xì)胞株
C1928 SW 780細(xì)胞株
C1927 SW 1990細(xì)胞株
C1926 SW 1783細(xì)胞株
C1925 SW 1573細(xì)胞株
C1924 SW 1353細(xì)胞株
C4230 SW 1271[SW-1271; SW1271]細(xì)胞株
C4729 SW 1088[SW-1088; SW1088]細(xì)胞株
C1241 SV-HUC-1細(xì)胞株
C5069 SVEC4-10細(xì)胞株
C7203 SV40MES13細(xì)胞株
C7204 SV40LT-SMCCloneHEP-SA細(xì)胞株
C1239 SV40 MES 13細(xì)胞株
C1238 SUSM-1細(xì)胞株
C1237 SUP-T1細(xì)胞株
C1236 SUP-M2細(xì)胞株
C6042 Super Tube細(xì)胞株
C1235 SUP-B1人Ph+細(xì)胞株
C1234 SUP-B15細(xì)胞株
C1233 SUNE-1細(xì)胞株
C1920 SUN-449細(xì)胞株
C1919 SUME-a細(xì)胞株
C7114 SUM52PE細(xì)胞株
C7113 SUM44PE細(xì)胞株
C7112 SUM190PT細(xì)胞株
C7111 SUM159PT細(xì)胞株
C1232 SUM159細(xì)胞株
C7110 SUM149PT細(xì)胞株
C7109 SUM1315MO2細(xì)胞株
C7108 SUM102PT細(xì)胞株
C1231 SU-DHL6細(xì)胞株
C1230 SU-DHL-5細(xì)胞株
C1229 SU-DHL-4細(xì)胞株
C1228 SU-DHL-2細(xì)胞株
C1392 SU-DHL-10細(xì)胞株"
標(biāo)簽： MLO-   MLO-Y4復(fù)蘇細(xì)胞   上海市復(fù)蘇細(xì)胞系   上海市復(fù)蘇細(xì)胞系廠家