IPI-2I貼壁細(xì)胞系

IPI-2I貼壁細(xì)胞系 "


細(xì)胞培養(yǎng)方面注意的幾點(diǎn)：
無菌意識要強(qiáng)：實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺以紫外燈照射30分鐘，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。
每次操作只處理一株細(xì)胞株，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面。
無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置，其它個人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以70%擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。
小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻(xiàn)可能對相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲龊脱趸矫娴模@種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時(shí)，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計(jì)時(shí)，一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因?yàn)闀斐沙恋砦镏@著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清（包括不同批次）對細(xì)胞的影響。" "


細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：
傳代培養(yǎng)：是指細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶以1：2或1：2以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細(xì)胞，可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代，部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。
實(shí)驗(yàn)步驟：① 入無菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消雙手;
② 倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預(yù)熱。
③ 超凈臺臺面應(yīng)整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔;
④ 打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右，關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機(jī)清潔空氣除去臭氧;
⑤ 點(diǎn)燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)。
⑥ 將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
⑦ 倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。
⑧ 每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中。
⑨ 加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋，適度擰緊后稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。
⑩ 對懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，步驟7-9不做。直接將細(xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。
注意事項(xiàng)
① 傳代培養(yǎng)時(shí)注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每種細(xì)胞使用一套器材。
② 每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代。
③ 如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象，應(yīng)立即采取措施，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞，如果必須挽救，可加含有的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。
傳代細(xì)胞的建系和維持：細(xì)胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細(xì)胞種子凍存來實(shí)現(xiàn)。
對每一個細(xì)胞系來說都有其自身的特點(diǎn)，要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作。" "


常見培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)防污染的有效措施：
體外培養(yǎng)的細(xì)胞受到嚴(yán)重污染時(shí)，有時(shí)即使想盡各種辦法也難以挽回。因此，防止污染，預(yù)防是關(guān)鍵。只有將預(yù)防措施貫穿于整個細(xì)胞培養(yǎng)的始終，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：
（1）添加：各種性質(zhì)不同，對各種微生物的作用也不同，聯(lián)合應(yīng)用比單用效果好，預(yù)防性應(yīng)用比污染后使用好（但迄今尚無對抗支原體）。但反復(fù)使用會使微生物產(chǎn)生耐藥性，且對細(xì)胞本身也有一定影響，因此為避免誘導(dǎo)抗藥，應(yīng)定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的，或盡可能不用處理。
（2）從物品、用品消著手：細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消要，各種溶液*要仔細(xì)，并在取樣檢菌一周后確認(rèn)無菌才能使用。同時(shí)，在無菌過濾操作中，隨著濾過體積的增大，濾膜破損的可能性增加，故應(yīng)選擇最后過濾的液體進(jìn)行檢測。定期對培養(yǎng)箱進(jìn)行消。具體操作：75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后，使用可移動的紫外燈至少消30min，加入高壓過的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度。也可配制300ml的飽和銅加3L 超純水混合成銅溶液加入水槽中。
（3）從操作者做起：①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用 75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長，以免燒焦產(chǎn)生有氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消水浸泡的紗布擦拭臺面。
（4）防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。重要細(xì)胞系的傳代工作應(yīng)由兩人獨(dú)立進(jìn)行。
（5）無菌室的消①新潔爾滅*擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比，的優(yōu)點(diǎn)是便宜，而且可以稀釋50倍用，而同樣量的酒精價(jià)格可能是新潔爾滅的幾十倍。②熏蒸法：是一種廣譜劑菌，其水溶液和氣體對各種、芽孢及等微生物均有殺滅作用。價(jià)廉，熏蒸消時(shí)不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的水溶液中一般含37－40%的。" "


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C7169 MT-3細(xì)胞株
C1717 MT-2細(xì)胞株
C0917 MSTO-211H細(xì)胞株
C1716 mSk-FBCs-12細(xì)胞株
C0916 MSCS細(xì)胞株
C0915 MS751細(xì)胞株
C0914 MS1細(xì)胞株
C0913 MRMT-1細(xì)胞株
C7107 MRK-nu-1細(xì)胞株
C4220 MRC-5細(xì)胞株
C1715 MPP 89細(xì)胞株
C0910 MPC-83細(xì)胞株
C1389 MPC5細(xì)胞株
C5085 MPC-11細(xì)胞株
C0908 MPC細(xì)胞株
C0907 MOVAS細(xì)胞株
C0906 Mouse podocyte細(xì)胞株
C7167 Mono-Mac-6細(xì)胞株
C0905 MONOMAC6細(xì)胞株
C0904 Mo-MuLV/3T3細(xì)胞株
C4521 MOLT-4細(xì)胞株
C0902 MOLT-3細(xì)胞株
C7197 MOLT-16細(xì)胞株
C7178 MOLP-8細(xì)胞株
C0901 MOLP-2細(xì)胞株
C7067 MOLM-16細(xì)胞株
C7196 MOG-G-UVW細(xì)胞株
C1394 MODE-K細(xì)胞株
C0900 Mo7e細(xì)胞株
C1714 mNSCs-11細(xì)胞株
C6046 MNNG/HOS Cl #5[R-1059-D]細(xì)胞株
C0899 M-NFS-60細(xì)胞株
C0898 MN9D細(xì)胞株
C5076 MMQ細(xì)胞株
C1712 mMMSC-11細(xì)胞株
C1711 MMAc·SF細(xì)胞株
C0896 Mm96L細(xì)胞株
C0895 MM45T.Li細(xì)胞株
C0894 MM1S細(xì)胞株
C7065 MM.1S細(xì)胞株
C5021 MLTC-1細(xì)胞株
C0892 MLO-Y4細(xì)胞株
C1710 MLMA細(xì)胞株"
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