COLO 201細胞永生化人結直

COLO 201細胞永生化人結直腸腺癌 "


細胞培養(yǎng)相關培養(yǎng)基選購基本指南：
如何選擇培養(yǎng)基：經常聽到有人問，這種細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單，也可以好復雜。為什么這樣說呢?如果這種細胞是購自一些細胞庫，那很簡單，問供應商就行了?；蛘哒业较嚓P的文獻，作為參考。
培養(yǎng)基這么多種，要選擇起來也是個頭疼的事情。除了部分培養(yǎng)基是公開配方的，或者是專門針對某一種細胞的，如昆蟲基本培養(yǎng)基和神經祖細胞基礎培養(yǎng)基， 但是大部分液體培養(yǎng)基都是配方的，也就是說其中的成分是保密的。那么你只能是檢索文獻、讓供應商推薦，然后用自己的細胞做幾次傳代培養(yǎng)來選出最合適的培養(yǎng)基。畢竟實踐出真知。
怎么樣才可以買到好的培養(yǎng)基產品：首先，當然需要找對品牌，其次是找對自己所在區(qū)域的品牌代理商，針對自己所養(yǎng)的細胞，咨詢供應商該選用哪種的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，這樣就可以買到好的而且適合自己的培養(yǎng)基產品。
關于培養(yǎng)基品牌，目前公司所知道的高校實驗室有些同學在用Corning系列培養(yǎng)產品，也有同學在用Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)等品牌的產品。
培養(yǎng)基的選擇和使用
MEM：成分簡單，貼壁細胞。
DMEM：分高糖型和低糖型。
IDMEM：適合細胞密度低，生長困難的細胞。如雜交細胞的篩選，DNA轉染后轉化細胞的篩選培養(yǎng)。
RPM1640：應用最廣泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細胞培養(yǎng)，主要針對淋巴細胞，也適合其他細胞。
199、109培養(yǎng)基：成分齊全，培養(yǎng)效果較好。
F10培養(yǎng)基：適合小鼠及人類二倍體細胞培養(yǎng)。
F12培養(yǎng)基：適合單細胞分離培養(yǎng)及無血清培養(yǎng)。
McCoy’s5A培養(yǎng)基：特別適合原代細胞及較難培養(yǎng)細胞的生長。" "


公司提供部分ATCC細胞有(限于頁面篇幅，公司全部細胞并未展示，如有具體所需細胞，請咨詢我們哦┈技┈術(訂┈購)┈熱┈線┈：┈１┈８┈３┈０┈１┈９┈０┈８┈２┈７┈９┈；HTB-58|SK-MES-1細胞；HTB-55|Calu-3細胞；HTB-56|Calu-6細胞；CCL-171|MRC-5細胞；CCL-75|WI-38細胞；CRL-8024|PLC/PRF/5細胞；HTB-57|SK-LU-1細胞；CCL-211|Hs888Lu細胞；HTB-172|NCI-H209細胞；CRL-1932|786-O細胞；CRL-3216|293T細胞；CRL-11268|293T/17細胞；CRL-2190|HK-2細胞；CRL-1933|769-P細胞；HTB-46|Caki-1細胞；CCL-105|SW-13細胞；HTB-44|A498細胞；CRL-1611|ACHN細胞；HTB-4|T24細胞；HTB-3|ScaBER細胞；HTB-2|RT4細胞；HTB-1|J82細胞；HTB-9|5637細胞；CCL-79|Y1細胞；HTB-45|A-704細胞；HTB-22|MCF-7細胞；HTB-26|MDA-MB-231細胞；HTB-132|MDA-MB-468細胞；CRL-2336|HCC1937細胞；HTB-128|MDA-MB-415細胞；HTB-129|MDA-MB-435S細胞；HTB-130|MDA-MB-436細胞；HTB-131|MDA-MB-453細胞；HTB-30|SK-BR-3細胞；CRL-2539|4T1細胞；CRL-2314|HCC38細胞；HTB-122|BT-549細胞；HTB-20|BT-474細胞；CRL-2122|CCD-1095Sk細胞；HTB-78|Sw626細胞；HTB-161|OVCaR-3細胞；HTB-75|Caov-3細胞；CRL-1572|PA-1細胞；HTB-77|SK-OV-3細胞；CRL-1978|ES-2細胞；HTB-112|HEC-1-A細胞；HTB-113|HEC-1-B細胞；CRL-1622|KLE細胞；" "


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傳代培養(yǎng)及其操作步驟：
原代細胞培養(yǎng)成功以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的利處在于提供了大量的實驗材料，便于實驗。
1.操作步驟
（1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液。
（2）向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。
（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進行消化，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現胞質回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化。
（4）吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化。
（5）使用彎頭吸管，吸取瓶內培養(yǎng)液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞。
（6）用計數板計數后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
（7）細胞培養(yǎng)換液時間應根據細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般2～3d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液。
2.注意事項
（1）掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷。
（2）掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。
體內細胞培養(yǎng)及其操作步驟：
1． 瘤細胞懸液接種
（1）無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或對數生長期培養(yǎng)瘤細胞。
（2）在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經80～100目篩網過濾成細胞懸液。
（3）培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍。
（4）計數并調整細胞濃度至107～108／ml。
（5）常規(guī)消后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml／部位，＞106細胞)。初次接種成功率低，細胞數盡可能多一些。
（6）次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。
2． 腹水瘤的建立與腹水瘤的接種 將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。
（1）將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數。
（2）消動物，左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞。
（3）接種腹水瘤細胞后約7~12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
（4）抽取的腹水經3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩? COLO 201細胞永生化人結直腸腺癌 "


實驗室細胞培養(yǎng)經驗分享：
啟蒙老師的重要性：一般進實驗室都有師兄師姐帶著做，他們就是你做細胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細節(jié)、理論講解就成了你操作的準則，如營養(yǎng)液、細胞瓶的擺放位置；處理程序；開蓋手法；細胞吹法等等。要學會他們的正確操作，在次的時候就要重視。
像養(yǎng)孩子一樣養(yǎng)細胞：細胞真的很脆弱，每天都去看看它，以防止出現培養(yǎng)箱缺水、缺、停電、溫度不夠等異?，F象，也好及時解決這些意外，避免重復實驗帶來的更大痛苦。
好細胞要及時保種：細胞要分批傳代，這樣即使有一批出了問題，還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。但這是我血的教訓，有一次細胞污染了，全軍覆沒。當時可后悔沒有保種。
每種細胞都有自己的特性，要區(qū)別對待：細胞跟人一樣，不同的細胞，培養(yǎng)特性是不一樣的。培養(yǎng)過程中要細細體會。不同細胞株使用不同的培養(yǎng)基和血清。
如我養(yǎng)的平滑肌細胞很活躍，喜歡熱鬧，2~3天就好多人口，而且不太愛吃喝，真是養(yǎng)的孩子了。內皮細胞和平滑肌細胞性格相近，不過它很不講衛(wèi)生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要經常換洗才行。RAW264.7細胞也很開朗，而且很能吃，要經常喂它，頭疼的是細胞很容易活化，培養(yǎng)它的瓶子和環(huán)境沒有內素才好，不過我這個當媽的很難滿足它了。
培養(yǎng)前的工作準備充分：包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡24h。晾干后包扎，160℃干烤2h待用。
試劑配置。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意pH值的調節(jié)。
無菌檢驗。主要采用過濾：如胰酶、、G-418溶液、各類培養(yǎng)基、酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓：如PBS、D-Hank's等。
試劑分裝保存：包括營養(yǎng)液、胰酶、血清等。
血清特別重要。血清必須貯存于–20℃，如果一次無法用完一瓶，可將40～50ml分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）"
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