動(dòng)物組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提試劑盒類目 > 商鋪首頁(yè) > 產(chǎn)品展示 > 武漢市試劑盒廠家_現(xiàn)貨供應(yīng)自產(chǎn) 動(dòng)物組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提試劑盒

現(xiàn)貨供應(yīng)自產(chǎn) 動(dòng)物組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提試劑盒

[內(nèi)質(zhì)網(wǎng)]

武漢市試劑盒廠家

價(jià)格： 電議

物流： 暫無(wú)物流地址| 賣家支付運(yùn)費(fèi)

可銷售總量： 0件

手機(jī)： 15308622976 郵箱： bio@biohao.com

傳真： 尚未完善 地址： 湖北武漢市

在線詢盤聯(lián)系廠家：15308622976 027-89352536

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級(jí)別： 優(yōu)級(jí)純GR

動(dòng)物組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提試劑盒

一，試劑盒組份

組份	P0060 (20T)	P0060 (50T)	P0060 (100T)
5×Lysis Buffer	20 mL	50 mL	100 mL
2.5M CaCl2	6mL	15mL	30mL
Store Buffer	6mL	15 mL	30mL

二，說(shuō)明

本試劑盒可用于從動(dòng)物組織中分離出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)一般有密度梯度離心、鈣沉淀和超速離心等方法，本試劑盒采用鈣沉淀法提取。此方法操作簡(jiǎn)單，對(duì)離心機(jī)要求不高，所得內(nèi)質(zhì)網(wǎng)純度一般。因?yàn)閮?nèi)質(zhì)網(wǎng)含量少，提取困難，要求樣本量大，一般不適用于從培養(yǎng)細(xì)胞中提取。

三，操作步驟

準(zhǔn)備工作：將5×Lysis Buffer用雙蒸水稀釋成1×Lysis Buffer（1體積5×Lysis Buffer加入4體積的水混勻，稀釋后可保存一個(gè)月），根據(jù)用量，將2.5M CaCl2稀釋成8mM CaCl2(取320ul濃縮液稀釋成100ml，現(xiàn)配現(xiàn)用，保存不超過(guò)48小時(shí))，將稀釋好的1×Lysis Buffer和8mM CaCl2 2-8℃存放。準(zhǔn)備冷的PBS或者生理鹽水。

1. 樣本處理及勻漿：稱取1g左右新鮮組織如肝臟、心肌等，切成不超過(guò)3mm厚片以方便清洗，用冷的PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪為碎塊，放入玻璃勻漿器內(nèi)，再加入1 mL冰預(yù)冷的1×Lysis Buffer，冰上研磨組織40次左右，到看不見(jiàn)明顯碎塊，也可用組織研磨儀處理樣本(可一次性將5ml 1×Lysis Buffer都加入)，但處理?xiàng)l件請(qǐng)自行摸索，原則是盡量多破細(xì)胞膜而少破亞細(xì)胞膜，在其中找到平衡。

2. 將勻漿物轉(zhuǎn)移到合適的離心管，再加入4ml預(yù)冷的1×Lysis Buffer，混勻。如果用研磨儀處理，可一次性將5ml 1×Lysis Buffer都加入。

3. 4℃，1000× g離心5 min，沉淀中主要為細(xì)胞和細(xì)胞核。

4．取上清（如果最上層有少量脂肪，可小心吸取脂肪丟棄，再取上清），加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。沉淀有線粒體，可從中提線粒體蛋白。

5.將上清測(cè)體積并轉(zhuǎn)移到合適的燒杯中，邊攪拌邊慢慢加入8體積的預(yù)冷的8mM CaCl2，加完后再次4℃攪拌15 min。

6. 將上步的混合物分裝入合適的離收管中，4℃，8000× g 離心10 min。

7．棄上清，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在沉淀中。

8. 用100-300μL Store Buffer 或合適的緩沖液重懸內(nèi)質(zhì)網(wǎng)沉淀，立即使用或-70℃保存。

附：如果實(shí)驗(yàn)室有條件，可以從第4步結(jié)束后的上清，采用100 000× g（十萬(wàn)G） 4℃離心60 min也可得到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)沉淀，兩種方法得到的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)組分并不完全相同。

四注意事項(xiàng)：

1. 為保證獲得完整的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞是制備內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的比較關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

2. 本試劑盒可以等比減少樣本和試劑用量，比如一次用100mg樣本，各試劑只用到十分之一，但結(jié)果可能是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提得的量特別少，以至后期實(shí)驗(yàn)無(wú)法展開(kāi)。

3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。