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供應(yīng)RIPA裂解液（中）NobleRyderP0904

北京市裂解液中廠家

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RIPA裂解液（中） NobleRyder P0904

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1、 品簡介：

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品包裝	產(chǎn)品價格
P0904	RIPA裂解液（中）	100ml	220.00元

2、     我們生產(chǎn)的RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
    RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關(guān)于不同的RIPA裂解液以及我們生產(chǎn)的其它裂解液的主要特點和差異，以及如何選擇裂解液可參考附錄。
    RIPA裂解液（中）的主要成分為50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。
    用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
包裝清單：

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝
P0904	RIPA裂解液（中）	100ml
	PMSF（100mM）	1.5ml
—	說明書	1份

3、保存條件：
    -20℃保存，一年有效。
注意事項：
    為取得的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當分裝后使用。
    裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
    關(guān)于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過一些預(yù)實驗來摸索的適合您實驗條件的裂解液。
    為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4、 使用說明：
對于培養(yǎng)細胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組
DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NFκB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。