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蛋白電泳
我們通常把“蛋白電泳”俗稱為跑膠,瓊脂糖水平電泳槽廠商,如果按照這個(gè)字面意思來理解的話就是把蛋白質(zhì)放在膠上跑,為啥要讓蛋白質(zhì)在膠上跑呢?我們提到的蛋白是總蛋白,也就是說細(xì)胞里所有(理論上)蛋白都在里頭了,但是我們要檢測(cè)的只是其中的一兩種,所以我們得想辦法把各種蛋白質(zhì)分離開,借助的方法就是跑膠。與核酸電泳一樣,蛋白質(zhì)電泳也需要marker和log buffer。與核酸電泳不一樣的是,蛋白電泳(做WB時(shí))的marker本身就是帶有顏色的,在電泳過程中,我們可以清楚地看到marker上的每一個(gè)條帶的位置,而核酸電泳的過程中我們是看不到marker的每一條帶的,只有把膠經(jīng)過核酸染料染色后,并且在紫外光下我們才能看到marker的條帶。
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核酸電泳凝膠的制備和電泳步驟
操作方法如下:
(1) 根據(jù)所需要的凝膠的大小將相應(yīng)的凝膠托盤按正確位置放置在制膠器內(nèi);
(2) 稱取適量瓊脂糖,置電泳緩沖液中,加熱使瓊脂糖溶解;
(3) 待溶液冷至60℃,加入10mg/ml EB貯存液,使終濃度達(dá)0.5mg/ml;
(4) 在距離膠模底板0.5-1mm處放置電泳梳,將瓊脂糖溶液倒入膠模中,厚度約3-5mm,注意避免產(chǎn)生氣泡;
(5) 凝膠完全凝固后,移去梳子和透明膠,將凝膠放入電泳槽。加入TBE緩沖液使恰好沒過膠面約1mm;
(6) 將DNA樣品與1/6體積加樣緩沖液混合后,加入樣品槽中;
(7) 接通電源,使樣品槽在負(fù),用1-5v/cm的電壓,瓊脂糖水平電泳槽,電泳適當(dāng)時(shí)間;
(8) 電泳結(jié)束后,可將含EB的凝膠直接放在紫外線檢測(cè)儀上觀察,并拍照記錄,也可將不含EB的凝膠在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分鐘,再如上觀察和拍照,記錄結(jié)果。

那么哪些地方可能會(huì)導(dǎo)致漏膠或者漏液這種問題呢?
1. 玻璃板側(cè)方或下方不小心因磕碰受損,這樣玻璃板受損處則不再平整,液體會(huì)從這些部位漏出。這種情況下只能更換玻璃板,而很多垂直槽的玻璃板和邊條壓片是粘在一起的,這種情況則需要一起更換。
有時(shí)由于清洗不到位,邊條壓片表面會(huì)有污物凸起,也會(huì)導(dǎo)致兩側(cè)不能密閉夾緊而漏膠。
2. 兩側(cè)的夾扣變松,或有些廠家的夾扣為了防止漏液,設(shè)計(jì)的很緊,瓊脂糖水平電泳槽哪家好,時(shí)間長(zhǎng)之后,玻璃板被擠壓變形,密封性下降。這樣玻璃板也會(huì)從兩側(cè)漏膠。
3. 底座的膠墊老化、變形或錯(cuò)位,玻璃板底部會(huì)發(fā)生漏膠。
4. 桌面不平整,玻璃板上夾具時(shí)不容易放正,玻璃板安裝到夾具上時(shí)是相對(duì)于底座橡膠墊傾斜的,這樣玻璃板底部會(huì)發(fā)生漏膠。
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