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洋蔥亞細胞定位培養(yǎng)-思特進

洋蔥亞細胞定位培養(yǎng)廠家

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武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產品研發(fā)、日化產品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司；公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產品生產平臺；可以開展各類動、植物、、細胞等生物實驗。

目的研究1個白木香倍半萜合酶(ASS)的亞細胞定位，確定其功能區(qū)域，洋蔥亞細胞定位培養(yǎng)，并比較3種瞬時表達體系在亞細胞定位研究中的優(yōu)劣。方法從白木香愈傷組織中提取總RNA，采用特異引物RT-PCR方法倍半萜合酶ASS基因，并連接于pEZS-NL載體和pFGC5941GFP改造載體上，分別構建pFGC5941-GFP-ASS、pEZS-NL-ASS-GFP 2種植物表達載體，分別利用根癌農侵染葉片、基因槍轟擊洋蔥表皮細胞、PEG轉化白木香原生質體3種技術進行瞬時轉化表達，激光共聚焦顯微鏡下觀察表達出的綠色熒光蛋白(GFP)融合蛋白的亞細胞定位。結果在葉片表皮細胞、洋蔥表皮細胞及白木香原生質體中，融合蛋白綠色熒光均能被觀察到。ASS基因與GFP的融合蛋白產物在葉片中定位于胞質，在洋蔥表皮中定位于胞質和細胞核，白木香原生質體中定位于胞質和質體。結論 ASS基因在白木香原生質體胞質及質體定位;對3種體系的結果比較表明，應用不同體系研究蛋白的亞細胞定位可能出現(xiàn)不同的結果，這可能與同源或異源表達的植物細胞的特性有關。

柑橘童期長達8年以上，嚴重阻礙了遺傳育種進展，因此縮短童期有著十分重要的意義。作為柑橘類落葉果樹，枳/早實枳與大多數(shù)落葉的草本植物相似，需要經過冬季低溫誘導(春化作用)才能開花。FLOWERING LOCUS C(FLC)是草本植物春化途徑關鍵基因。冬性一年生植物在秋季萌發(fā)，在冬季前由于FLC高水平表達導致成花受到抑制，在冬季時由于低溫春化作用導致體內FLC的表達量降低，并擁有在春天成花的能力。本實驗室前期從枳中分離了FLC同源基因Pt FLC，發(fā)現(xiàn)Pt FLC在不同發(fā)育時期存在選擇性剪切，并分離出了五個轉錄本，這種調控方式與草本植物不同。為研究Pt FLC在枳/早實枳發(fā)育中的作用，本研究分別構建了Pt FLC四個轉錄本Pt FLCv1、Pt FLCv2、Pt FLCv3和Pt FLCv5的超表達融合載體35S::Pt FLC-GUS與35S::Pt FLC-EGFP，以期獲得帶有標記蛋白的轉基因早實枳，進而對Pt FLC功能進行研究。

紫花苜蓿(Medicago sativa L.)在范圍內分布廣泛，是公認的高產牧草，莖葉中含有豐富的蛋白質，被譽為“牧草”。苜蓿不僅營養(yǎng)豐富，其次生代謝產物苜蓿皂甙(alfalfa saponins)近年來被認為是苜蓿的藥用功能的主要來源:具有良好的降膽固醇、效果，還有、、、殺蟲等藥用及生物活性。目前，對于苜蓿的開發(fā)利用主要集中于提高家畜飼料營養(yǎng)價值及改良飼料加工等方面，然而苜蓿皂甙等次生代謝產物卻被研發(fā)成專門的產品或者添加劑應用于生產實踐中。本文將對紫花苜蓿苜蓿皂甙合成途徑中關鍵酶基因進行篩選、和功能分析，為苜蓿品質改良及選育新品種提供新的理論依據(jù)。

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