供應(yīng)非變性蛋白裂解液
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武漢市非變性蛋白裂解液廠家
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- 分類(lèi)： 蛋白質(zhì)
- 級(jí)別： 試驗(yàn)試劑LR
- 產(chǎn)品規(guī)格： 100ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品包裝 | 產(chǎn)品價(jià)格 |
| P1016 | 非變性蛋白裂解液 | 100ml | 220.00元 |
非變性細(xì)胞裂解緩沖液(Nondenaturing Lysis Buffer)內(nèi)含非離子型去垢劑、鹽、和蛋白酶抑制劑，能裂解細(xì)胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結(jié)合或酶學(xué)活性，因此適宜于進(jìn)行共沉淀。另外，有些抗體對(duì)非變性蛋白具有更高的結(jié)合能力或只能識(shí)別非變性蛋白的抗原位點(diǎn)，這種情況應(yīng)該使用非變性裂解。
非變性細(xì)胞裂解緩沖液的主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% NP-40以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍椎慕到?，并維持原有的蛋白間相互作用。
非變性蛋白裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝 |
| P1016 | 非變性蛋白裂解液 | 100ml |
| | PMSF（100mM） | 1.5ml |
| | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
-20℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
為取得的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
關(guān)于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過(guò)一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)摸索的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解非變性蛋白裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、沉淀和共沉淀等操作。
裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。
對(duì)于組織樣品：
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解非變性蛋白裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、沉淀和共沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
附：我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異和選擇
首先請(qǐng)參考下表，了解各種裂解液的主要特點(diǎn)和差異。
| 產(chǎn)品編號(hào) | P1001 | P1002 | P1004 | P1006 | P1010 | P1012 |
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | Western及IP細(xì)胞裂解液 | RIPA裂解液(強(qiáng)) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) | NP-40裂解液 | SDS裂解液 |
| 有效裂解成分 | 1% Triton X-100 | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS | 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS | 1% NP-40, 0.25% deoxycholate | 1% NP-40 | 1% SDS |
| 裂解強(qiáng)度 | 溫和 | 強(qiáng) | 中 | 溫和 | 溫和 | 強(qiáng) |
| 對(duì)膜蛋白的提取 | 一般 | 很好 | 較好 | 一般 | 一般 | 很好 |
| 對(duì)胞漿蛋白的提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 對(duì)核蛋白的提取 | 較好 | 很好 | 較好 | 較好 | 較好 | 很好 |
| 胞漿化蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 含蛋白酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 含酯酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 主要用途 | WB, IP,co-IP | WB, IP | WB, IP | WB, IP, co-IP | WB, IP,co-IP | WB, ChIP |
用于普通的Western、IP或co-IP，我們推薦使用Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)，該裂解液已被國(guó)內(nèi)各大研究機(jī)構(gòu)廣泛使用，用戶(hù)普遍反映很好。裂解細(xì)胞或組織后，沒(méi)有非常粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。 另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于化蛋白的Western檢測(cè)。
對(duì)于某些特殊蛋白的IP，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液(強(qiáng)、中或弱)或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時(shí)候背景很高，即非特異的蛋白也被IP下來(lái)，則需要選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液，例如RIPA裂解液(強(qiáng)或中)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無(wú)法被IP下來(lái)，則說(shuō)明裂解液的強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
對(duì)于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強(qiáng)、中)或SDS裂解液。
| P0270 | 5×蛋白上樣緩沖液（配有β-巰基） | 10ml | 120 |
| P0280 | 5×蛋白上樣緩沖液（含DTT） | 1ml/10ml | 40/160 |
| P0290 | 5×非變性蛋白上樣緩沖液 | 10ml | 100 |
| P0300 | Tris-甘氨酸蛋白電泳緩沖液（干粉） | 10L | 180 |
| P0310 | 10×電泳轉(zhuǎn)移緩沖液 | 500ml | 100 |
| P0320 | 10%過(guò)氨(干粉） | 1ml | 15 |
| P0420 | 10%SDS | 100ml | 48 |
| P0330 | 30%酰胺/甲叉溶液（29:1） | 100ml/500ml | 60/180 |
| P0335 | 40%酰胺/甲叉溶液（37.5:1） | 100/500ml | 80/280 |
| P0350 | 4×SDS-PAGE分離膠緩沖液 | 100ml/500ml | 60/180 |
| P0360 | 4×SDS-PAGE濃縮膠緩沖液 | 100/500ml | 60/180 |
| P0370 | 10×麗春紅染液 | 10ml | 90 |
| P0380 | 考馬斯亮藍(lán)快速染色液 | 500ml | 100 |
| P0390 | 1M Tris-HCL(PH6.8) | 100/500ml | 40/160 |
| P0400 | 1.5M Tris-HCL(PH8.8) | 100/500ml | 46/160 |
| P0120 | Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒 | 2500微孔 | 150 |
| P0130 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 | 500微孔 | 280 |
| P0040 | 線粒體提取試劑盒 | 50T/100T | 320/580 |
| P0045 | 植物線粒體提取試劑盒 | 50T/100T | 420/780 |
| P0050 | 細(xì)胞核提取試劑盒 | 50T/100T | 320/580 |
| P0260 | PMSF(100mM) | 1.5/10ml | 30/100 |
| P1001 | Western及IP細(xì)胞裂解液 | 100ml | 220 |
| P1002 | RIPA裂解液(強(qiáng)) | 100ml | 220 |
| P1004 | RIPA裂解液(中) | 100ml | 220 |
| P1006 | RIPA裂解液(弱) | 100ml | 220 |
| P1008 | RIPA裂解液(強(qiáng)中弱套裝) | 3*50ml | 280 |
| P1010 | NP-40裂解液 | 100ml | 220 |
| P1012 | SDS裂解液 | 100ml | 220 |
| P1014 | 細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 | 50T/200T | 420/980 |
| P1016 | 非變性細(xì)胞裂解緩沖液 | 100ml | 220 |
| P1240 | 酵母蛋白小量提取試劑盒 | 50T/100T | 320/560 |
| P0430 | 20×TBS | 500ml | 100 |
| P0440 | TBST（TBS-T） | 500ml | 60 |
| P0470 | 膜封閉液 | 100ml | 42 |
| P0480 | 膜再生液 | 100ml/500ml | 60/180 |
| P0500 | SDS-PAGE蛋白電泳套裝 | 50T | 460 |
| P1260 | ECL超敏發(fā)光液 | 25ml/100ml/250ml | 160/480/960 |
| N0160 | TMB單組分顯色液 | 100ml/500ml | 220/820 |
| A0050 | DAB顯色試劑盒（20×） | 3ml | 100 |
| A0080 | 4％ | 100/500ml | 60/200 |
| A0070 | 10×多聚賴(lài)氨酸溶液(組化) | 10ml | 260 |
| A0090 | 抗熒光衰減封片劑 | 5ml/25ml | 70/240 |
標(biāo)簽： 蛋白提取 蛋白提取 武漢市非變性蛋白裂解液 武漢市非變性蛋白裂解液廠家
￥210
武漢百浩天生物科技有限公司
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供應(yīng)玻璃珠Glass
￥240.00
現(xiàn)貨供應(yīng)自產(chǎn)植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提試劑盒
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現(xiàn)貨供應(yīng)自產(chǎn) 動(dòng)物組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提試...
電議
供應(yīng)Hanks-HBSS含鈣鎂
￥80.00
供應(yīng)D-Hanks
￥80.00
