供應DH5α感受態(tài)細胞C1100

產(chǎn)品編號： C1100          規(guī)格：10×100 μl         140/盒

DH5α 感受態(tài)細胞說明書
貨 號：C1100                   
規(guī) 格：10×100ul / 20×100ul
保 存：-70℃保存，運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70 ℃保存至少 6 個月。
產(chǎn)品簡介：
本公司生產(chǎn)的DH5 α 感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌DH5 α 菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 108，-70 ℃保存3-5 個月轉化效率不發(fā)生改變。 基因型:   supE44 △lacU169 （φ80 lacZ△M15 ）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特   點:  一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與pUC 載體編碼的  β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)β 互補，可用于藍白斑篩選。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1 、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以 100ul 感受態(tài)細胞為例。
2 、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30 分鐘。
3 、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4 、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的SOC 或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng)1 小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5 、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應的 SOC 或LB平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整，如轉化的DNA總量較多，可取100ul 左右的轉化產(chǎn)物涂板；反之，如轉化的 DNA總量較少，可取200-300ul 的轉化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事項： 
 1、感受態(tài)細胞應保存在-70 ℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。 
 2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。 
 3、轉化時，轉化效率與外源 DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。 
 4、轉化率的計算：轉化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/ 鋪板DNA總量。 
 5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉化，將損失降到。
 

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