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藍白斑篩選鑒定

　　用于克1隆的酶還須通過額外的質(zhì)量鑒定――藍白斑篩選鑒定，以確定經(jīng)酶過量消化后DNA末端的完整性。該種鑒定方法為：用酶10倍過量消化適當?shù)妮d體上lacZ基因中單一的酶切位點，連接，轉(zhuǎn)化，并涂XGal/IPTG/Amp平板。成功地切割、連接和表達b-galactosidase可以說明克1隆后基因是完整的，一個完整的基因產(chǎn)生藍斑，一個不完整的基因(例如，降解的DNA末端)產(chǎn)生白斑。在進行藍白斑鑒定中，所有的限制性內(nèi)切酶產(chǎn)生的白斑數(shù)量不應超過3%。

錯位切割含目的基因的DNA部分片段和運載體一形成黏性末端

單酶切：同一種限制酶分別切割含目的基因DNA部分片段與運載體。這是較簡單的一種方法，含目的基因的DNA部分片段與運載體在同種限制酶作用下形成相同的黏性末端，這兩個黏性末端間能通過堿基間的配對而連接，進而形成重組DNA分子。

用同裂酶去切割含目的基因DNA部分片段與運載體。有一些來源不同的限制酶識別核苷酸順序和切割位置都相同，這類酶稱為同裂酶(同切酶或異源同工酶)。同裂酶產(chǎn)生同樣的切割，形成相同的黏性末端。

限制性內(nèi)切酶的質(zhì)量控制鑒定

限制性內(nèi)切酶的一個活性單位是指，在50μl 的反應體系里，采用隨酶提供的 NEBuffer，內(nèi)切酶，用1個小時的時間，消化1μg底物DNA所需要的酶量。酶切反應應在帶蓋的eppendorf 管中進行，選用技術數(shù)據(jù)卡上所標明的適宜溫度。在確定酶活性之前，濃縮的酶應該用推薦的貯存液稀釋成大約1，000 單位/ml。

質(zhì)量控制

所有質(zhì)量控制鑒定結果都公布在隨酶提供的技術數(shù)據(jù)卡上。

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