武漢友名生物(多圖)-mRNA切割酶

　　限制性內(nèi)切酶對(duì)環(huán)狀質(zhì)粒DNA產(chǎn)生的酶切片段數(shù)與切口數(shù)一致。因此，鑒定酶切后的片段在電泳凝膠的區(qū)帶數(shù)，mRNA切割酶，就可以推斷切口的數(shù)目;從片段遷移率可判斷酶切片段大小。用已知分子量的線狀DNA 為對(duì)照，通過(guò)電泳遷移率的比較，可以粗略地測(cè)出分子形狀相同的未知DNA的相對(duì)分子大小。

　　質(zhì)粒DNA的相對(duì)分子量(Mr )一般在106～107 范圍內(nèi)，如質(zhì)粒pBR的相對(duì)分子質(zhì)量為2.8×106 ，在細(xì)胞內(nèi)有三種構(gòu)型：①共價(jià)閉環(huán)DNA，常以超螺旋形式存在;②如果兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處斷裂，分子就能旋轉(zhuǎn)而鏈的張力，這種松弛型的分子叫作開(kāi)環(huán)DNA;③雙鏈線狀DNA由于兩條鏈的切口在同一部位被切斷，不能成環(huán)，完全開(kāi)放成線狀，簡(jiǎn)稱線性DNA。如果要測(cè)定質(zhì)粒DNA的相對(duì)分子量，建議把質(zhì)粒用單一切口的酶水解得到線性DNA部分片段。三種構(gòu)型的質(zhì)粒DNA 在電泳時(shí)的泳動(dòng)速度為：共價(jià)閉環(huán)DNA>線狀DNA >開(kāi)環(huán)DNA。

限制酶有什么作用？

在DNA重組技術(shù)中，限制酶主要用于：

1.在特異位點(diǎn)上切割DNA，產(chǎn)生特異的限制酶片段；

2.建立DNA分子的限制酶圖譜；

3.構(gòu)建基因文庫(kù)；

4.用限制酶切出的相同的粘性末端，以便重組。

5.許多用切割外來(lái)DNA的方法進(jìn)行自我保護(hù)，如切割感1染性噬菌體的DNA.這些產(chǎn)生一種能切割DNA的核酸內(nèi)切酶，一旦發(fā)現(xiàn)外來(lái)DNA便將其切割，因此它們有效地限制了噬菌體對(duì)的感1染，故這種核酸內(nèi)切酶被稱為限制酶.

6.每種限制酶特異識(shí)別專一DNA序列，并在切割位點(diǎn)將其準(zhǔn)確切割.

限制酶的限制作用實(shí)際就是限制酶降解外源DNA ，維護(hù)宿主遺傳穩(wěn)定的保護(hù)機(jī)制。Methylation是常見(jiàn)的修飾作用，可使腺piao呤A和胞嘧1啶C Methylation而受到保護(hù)。通過(guò)甲1基化作用達(dá)到識(shí)別自身遺傳物質(zhì)和外來(lái)遺傳物質(zhì)的目的。

所以，能產(chǎn)生防御病毒侵染的限制酶的，其自身的基因組中可能有該酶識(shí)別的序列，只是該識(shí)別序列或酶切位點(diǎn)被Methylation了。但并不是說(shuō)一旦Methylation了，所有限制酶都不能切割。大多數(shù)限制酶對(duì)DNAMethylation敏感，因此當(dāng)限制酶目標(biāo)序列與Methylation位點(diǎn)重疊時(shí)，對(duì)酶切的影響有3種可能，即不影響、部分影響、完全阻止。

對(duì)MethylationDNA的切割能力是限制酶內(nèi)在和不可預(yù)測(cè)的特性，因此，為有效的切割DNA，必須同時(shí)考慮DNA Methylation和限制酶對(duì)該類型Methylation的敏感性。另外，大部分商業(yè)限制酶如今專門用于切割Methylation DNA。