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普通的PCR儀
把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,叫傳統(tǒng)的PCR儀,GC Buffer,也叫普通PCR儀。
它是由主機,加熱模塊,PCR管,熱蓋,控制軟件組成。根據(jù)DNA部分片段高溫解鏈,降溫配對聚合原理,通過循環(huán)改變加熱模塊的溫度,微量不易于分辨的的DNA部分片段進行擴增成大量的DNA部分片段,從而對其進行分析鑒定。根據(jù)需要可結合電泳儀,水平電泳槽,一起應用。如果要做不同的退火溫度需要多次運行。主要是做簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。
該儀器主要應用于醫(yī)學臨床檢驗,食品檢測,科研機構,高等院校教學對遺傳變異,基因表達等進行研究。
不對稱PCR(asymmetric PCR)枝術
兩種引物濃度比例相差較大的PCR技術稱不對稱PCR.在擴增循環(huán)中引入不同的引物濃度.常用50~ 100+1比例。在起初的10~ 15個循環(huán)中主要產物還是雙鏈DNA.但當?shù)蜐舛纫锉幌谋M后。高濃度引物介導的PCR反應就會產生大量單鏈DNA.
應用:可制備單鏈DNA部分片段用于序列分析或核酸雜交的探針。
反轉錄PCR(reverse transcription, RT- PCR技術
當擴增模板為RNA時。需先通過反轉錄酶將其反轉錄為cDNA才能進行擴增。RT - PCR應用非常廣泛。無論是分子生物學還是臨床檢驗等都經常采用。
修飾引物PCR技術
為達到某些特殊應用目的.如定向克1隆、定1點突變、體外轉錄及序列分析等??稍谝锏?*-端加上酶切位點、突變序列、轉錄啟動子及序列分析結合位點等。
PCR有哪些應用領域?
基因表達
通??赏ㄟ^PCR來檢測不同細胞類型、組織和生物體在特定時間點的基因表達差異。首先,從目標樣品中分離出RNA并將mRNA逆轉錄成cDNA。隨后,通過由PCR擴增的cDNA數(shù)量,確定mRNA的初始水平。這一過程也被稱為逆轉錄PCR。
終點PCR 可通過凝膠里的擴增產物條帶強度對RNA的表達進行定量(一種半定量方法)。例如,對起始cDNA進行連續(xù)稀釋并擴增。通過凝膠電泳使不同起始量的終點PCR得率可視化,然后對條帶強度進行定量,并以管家基因為參照進行標準化,預估擴增靶點的相對表達水平。如今,終點PCR已基本被實時PCR 或qPCR 取代了,因為它們可獲得和的基因表達定量結果。
