渭南transwell細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)-英瀚斯

細(xì)胞傳代培養(yǎng)

操作步驟

1.將長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。

2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將胰酶棄去，加入10m培養(yǎng)液終止消化。觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)zhen孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1- -3分鐘。

4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37°C下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

附:消化液配制方法:

稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1 : 250)， 加入100ml無(wú)Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，濾器過(guò)濾chu菌，4°C保存，用前可在379C下回溫。胰酶溶液中也可加入EDTA，使終濃度達(dá)0.02%。

透射電鏡觀察:可見(jiàn)凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失，核染色質(zhì)固縮、邊.集，常呈新月形，核膜皺褶，胞質(zhì)緊實(shí)，細(xì)胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和調(diào)亡小體被臨近巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。

結(jié)果評(píng)判:調(diào)亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。調(diào)亡I期( pro-apoptosis nuclei)的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤(pán)繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象( citati)的空泡結(jié)構(gòu); IIa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生調(diào)亡小體。

公司目前擁有多項(xiàng)產(chǎn)品及技術(shù)，其中發(fā)明兩項(xiàng)，軟件著作權(quán)八項(xiàng)，實(shí)用新型三項(xiàng)，慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建公司，商標(biāo)兩件。公司先后獲得“江蘇省民營(yíng)科技企業(yè)”、“江蘇省科技型中小企業(yè)”、“江蘇省專精特新中小企業(yè)”等榮譽(yù)資質(zhì)，連續(xù)多年被評(píng)為“東南大學(xué)大學(xué)科技園企業(yè)”。2019年公司成為江蘇省生物技術(shù)協(xié)會(huì)第七屆理事會(huì)的特邀理事，成立了“李冬冬創(chuàng)新工作室”，并獲得了南京市“工人先鋒號(hào)”的榮譽(yù)稱號(hào)。