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供應(yīng)RIPA裂解液(中)RIPA裂解液中

武漢市ripa裂解液中廠家

價格： 220

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詳細(xì)信息（供應(yīng)RIPA裂解液(中)RIPA裂解液中）

貨　　號：	P1004
名　　稱：	RIPA裂解液(中)
規(guī)　　格：	100ml
價　　格：	220.00
#：

產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品包裝	產(chǎn)品價格
P1004	RIPA裂解液(中)	100ml	220.00元

    我們生產(chǎn)的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
    RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關(guān)于不同的RIPA裂解液以及我們生產(chǎn)的其它裂解液的主要特點和差異，以及如何選擇裂解液可參考附錄。
    RIPA裂解液(中)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。
    用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
包裝清單：

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝
P1004	RIPA裂解液(中)	100ml
	PMSF（100mM）	1.5ml
—	說明書	1份

保存條件：
    -20℃保存，一年有效。
注意事項：
    為取得的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。
    裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
    關(guān)于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過一些預(yù)實驗來摸索的適合您實驗條件的裂解液。
    為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會被裂解。
   對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和沉淀等操作。
   裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組
DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NFκB、p53等時，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

附：我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點、差異和選擇
首先請參考下表，了解各種裂解液的主要特點和差異。

產(chǎn)品編號	P1001	P1002	P1004	P1006	P1010	P1012
產(chǎn)品名稱	Western及IP細(xì)胞裂解液	RIPA裂解液(強)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)	NP-40裂解液	SDS裂解液
有效裂解成分	1% Triton X-100	1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS	1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS	1% NP-40, 0.25% deoxycholate	1% NP-40	1% SDS
裂解強度	溫和	強	中	溫和	溫和	強
對膜蛋白的提取	一般	很好	較好	一般	一般	很好
對胞漿蛋白的提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好
對核蛋白的提取	較好	很好	較好	較好	較好	很好
胞漿化蛋白提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好
細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制劑	是	是	是	是	是	是
含酯酶抑制劑	是	是	是	是	是	是
主要用途	WB, IP,co-IP	WB, IP	WB, IP	WB, IP, co-IP	WB, IP,co-IP	WB, ChIP

    用于普通的Western、IP或co-IP，我們推薦使用Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)，該裂解液已被國內(nèi)各大研究機構(gòu)廣泛使用，用戶普遍反映很好。裂解細(xì)胞或組織后，沒有非常粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于化蛋白的Western檢測。
    對于某些特殊蛋白的IP，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液(強、中或弱)或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時候背景很高，即非特異的蛋白也被IP下來，則需要選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液(強或中)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
    對于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強、中)或SDS裂解液。

標(biāo)簽：武漢市ripa裂解液中武漢市ripa裂解液中廠家