染料法貓血支原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒 染料法貓血支原體定量PCR試劑盒

染料法貓血支原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Dye-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma haemofelis

貨號(hào)：Mqs-hfe-20    20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqs-hfe-50    50個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqs-hfe-100    100個(gè)反應(yīng)

儲(chǔ)存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1， 特異性識(shí)別貓血支原體和犬血支原體，不受貓和犬的其他寄生微生物的干擾。

2， 使用熱啟動(dòng)的Taq酶，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

3， 帶有陽性對(duì)照樣品（組分C），可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性，以及驗(yàn)證待測(cè)樣品中是否含有PCR抑制劑。

4， 帶有ROX參比染料，幫助校正加樣誤差和管間差異。

5， 帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

貓血支原體（Mycoplasma haemofelis），或稱為貓嗜血支原體、貓附紅細(xì)胞體，寄生于貓紅細(xì)胞表面，具多形性，可呈現(xiàn)為球狀、環(huán)狀或桿狀，對(duì)紅細(xì)胞有破壞作用，可引起傳染性溶血貧血癥，有時(shí)呈急性發(fā)作，可致命；有時(shí)呈慢性發(fā)作，出現(xiàn)嗜睡、厭食、粘膜慘白及黃疸、發(fā)燒、脾臟腫大等癥狀，并可能出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作。其傳播途徑為血液傳播，包括：吸血昆蟲叮咬、咬傷、輸血等。

目前已知寄生于貓血中的支原體有三種：貓血支原體，Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis；在PCR技術(shù)出現(xiàn)之前，這三種支原體被統(tǒng)稱為貓血巴爾通氏體（Haemobartonella felis）。有報(bào)道約14%的貧血貓呈血液支原體陽性。貓血支原體的致病能力強(qiáng)于貓血中的另兩種支原體。

寄生于犬血中的支原體有兩種：犬血支原體（Mycoplasma haemocanis)和Candidatus Mycoplasma haematoparvum。犬血支原體與貓血支原體親緣關(guān)系非常近，形態(tài)也類似。在實(shí)驗(yàn)條件下，貓可以感染犬血支原體，而犬不能感染貓血支原體。犬血支原體感染后有時(shí)不表現(xiàn)出癥狀，有時(shí)可能引起一些癥狀，包括：脫水、輕度貧血、心跳過速、黃疸、死亡，但是很少引起明顯的溶血，除非是做了脾切除手術(shù)或者發(fā)生了抑制。犬血支原體是犬類中most常見的嗜血支原體，分布極為廣泛，陽性率大約在0.5-40%之間。常用的檢測(cè)方法包括顯微鏡鏡檢法和PCR法。鏡檢法靈敏度低，實(shí)驗(yàn)誤差大，無法區(qū)分支原體種類，易受血液中其他物質(zhì)以及人工涂片方法的干擾，且支原體易從紅細(xì)胞表面脫落，造成漏檢。而PCR法在靈敏度上則有明顯的優(yōu)勢(shì)，且可以區(qū)分支原體種類。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒針對(duì)貓血支原體的16S rRNA基因的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物，可準(zhǔn)確識(shí)別貓血支原體和犬血支原體,僅與Mycoplasma haemobos有交叉反應(yīng)。Mycoplasma haemobos寄生于牛血中，不會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生影響。對(duì)320只貓的檢測(cè)表明，嗜血支原體的總陽性率為43.4%，貓血支原體的陽性率為12.8%。

本試劑盒包含熱啟動(dòng)Taq酶、dNTP（以UTP代替了TTP）、引物、陽性對(duì)照品、SYBR Green I染料、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（尿嘧啶-N-糖苷酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

熱啟動(dòng)Taq酶結(jié)合了特異性單克隆抗體的DNA聚合酶，在室溫下聚合酶活性被抗體抑制。在PCR循環(huán)的變性階段，抗體受熱被去除，聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動(dòng)”功能，可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

SYBR Green I可以與DNA雙鏈的小溝結(jié)合，結(jié)合后在497nm激發(fā)光照射下產(chǎn)生520nm的發(fā)射光。未結(jié)合雙鏈DNA的SYBR Green I基本不產(chǎn)生熒光。因此可以根據(jù)熒光值的大小判斷溶液內(nèi)DNA雙鏈的多寡，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)物的累積量。初始模板濃度越高，反應(yīng)循環(huán)數(shù)越高，則雙鏈DNA含量越高，熒光值也就越高。值得注意的是，SYBR Green I也可以結(jié)合非特異性PCR產(chǎn)物以及引物二聚體，此時(shí)產(chǎn)生的熒光與目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物無法區(qū)分。為了判斷熒光信號(hào)是否來自目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物，可以繪制熔解曲線。通過逐步緩慢升溫，使雙鏈DNA解離為單鏈DNA，同時(shí)檢測(cè)熒光值的變化，繪制曲線，根據(jù)熒光值觀察DNA解鏈的溫度。

UDG和dUTP可以阻止前次步驟殘余DNA的擴(kuò)增。dUTP可以確保擴(kuò)增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可從單鏈或雙鏈DNA上去除尿嘧啶殘基，從而阻止含有尿嘧啶的DNA作為下幾輪PCR的模板。在PCR循環(huán)開始前的UDG孵育步驟，可以破壞帶有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物。經(jīng)過該去除污染步驟后，UDG在正常的PCR循環(huán)過程中被高溫滅活，對(duì)PCR反應(yīng)沒有影響。

ROX不參與PCR反應(yīng)，在PCR反應(yīng)過程中熒光沒有變化，可以提供一條基線用于校正加樣誤差和管間差異，便于儀器自動(dòng)分析報(bào)告熒光與內(nèi)參ROX熒光的比值，使定量更準(zhǔn)確。ROX染料的激發(fā)波長(zhǎng)為584nm，發(fā)射波長(zhǎng)為612nm。用ROX進(jìn)行校正后可以使實(shí)驗(yàn)誤差減小十倍左右。

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探針法貓血支原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqt-hfe-20，Mqt-hfe-50，Mqt-hfe-100

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愛德華支原體PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-edwa-20，M-edwa-50，M-edwa-100

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嗜血支原體通用PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-hemo-20，M-hemo-50，M-hemo-100

染料法嗜血支原體通用實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqs-hae-20，Mqs-hae-50，Mqs-hae-100