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轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

轉(zhuǎn)錄組即某個(gè)物種或特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下產(chǎn)生的RNA的總和,是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段。與基因組不同的是,轉(zhuǎn)錄組的定義中包含了時(shí)間和空間的限定。同一細(xì)胞在不同的生長(zhǎng)時(shí)期及生長(zhǎng)環(huán)境下,其基因表達(dá)情況是不相同的。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-Seq)是指利用第二代高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行cDNA測(cè)序,分子生物檢測(cè)技術(shù),快速地獲取某一物種特定qi官或組織在某一狀態(tài)下的轉(zhuǎn)錄本。相對(duì)于傳統(tǒng)芯片而言,RNA-Seq無需預(yù)先設(shè)計(jì)探針,即可對(duì)物種的細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行檢測(cè),能夠提供較的數(shù)字化信號(hào),更高的檢測(cè)通量以及更廣泛的檢測(cè)范圍,大分子生物檢測(cè)服務(wù),是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的良好工具。















EMSA實(shí)驗(yàn)

EMSA:凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)和DNA序列相結(jié)合的技術(shù),初用于研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用,可用于定性和定量分析。分為2種類型:同位素標(biāo)記探針,分子生物檢測(cè)公司,非同位素標(biāo)記探針。

通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚bing烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測(cè)如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,南京分子生物檢測(cè),部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液。在檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白時(shí),依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA或RN片duan和gua核苷酸片段(特異),和其它非相關(guān)的片段(非特異),來確定DNA或RNA結(jié)合蛋白的特異性。在競(jìng)爭(zhēng)的特異和非特異片段的存在下,依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來確定特異結(jié)合。




STR檢測(cè)

短串聯(lián)重復(fù)(Short tandem repeats, STR),又稱微wei星DNA(Microsatellite DNA)或簡(jiǎn)單重復(fù)序列(Simple repeat sequence, SRS或SSR),是廣泛存在于原核生物和真核生物基因組中的核苷酸重復(fù)序列。有絲分裂過程中DNA鏈之間的錯(cuò)配引起的fu制滑動(dòng)被認(rèn)為是導(dǎo)致STR產(chǎn)生的較為常見原因,并且依據(jù)不同fu制單元大小的不同以及不同物種之間,fu制滑動(dòng)發(fā)生的概率也不相同。

STR是以核心序列 (core repeat units) 首尾相連多次重復(fù)形成。每個(gè)STR的核心序列結(jié)構(gòu)相同,長(zhǎng)度為2-6bp,但其重復(fù)單位數(shù)目和重復(fù)區(qū)域的長(zhǎng)度不同,因此STR在不同種族、不同人群之間的分布具有差異性,構(gòu)成了STR遺傳多態(tài)性。不同個(gè)體之間在一個(gè)同源STR位點(diǎn)的重復(fù)次數(shù)也不同,因而同指紋識(shí)別一樣,STR位點(diǎn)分析也可對(duì)個(gè)體進(jìn)行身份識(shí)別。通過識(shí)別個(gè)體基因組在特定位點(diǎn)的特定序列重復(fù),即可創(chuàng)建其基因檔案?;诖?,STR分析法已經(jīng)成為一種重要的鑒定分析方法,應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)、qin子鑒定及細(xì)胞鑒定等領(lǐng)域。






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