英瀚斯(多圖)-RNA提取實(shí)驗(yàn)公司

microRNA芯片:

RNA干擾(RNA Interference， RNAi)現(xiàn)象是一種進(jìn)化上保守的抵御轉(zhuǎn)基因或外來病毒qin犯的防御機(jī)制。將含有靶基因mRNA同源互補(bǔ)序列的RNA（Double strand RNA， dsRNA）導(dǎo)入細(xì)胞后，能夠特異地識別該mRNA，引起mRNA的降解，從而導(dǎo)致相應(yīng)的功能缺失。RNAi提供了一種經(jīng)濟(jì)、快捷、gao效的抑制特異基因表達(dá)的技術(shù)手段，該技術(shù)已被廣泛用于研究基因功能和chuan染性疾病及惡xingzhong瘤基因zhi療領(lǐng)域。目前常用的RNA干擾手段為miRNA、 shRNA和siRNA等。

MiRNA是一類可以通過RNAi機(jī)制調(diào)節(jié)基因表達(dá)的內(nèi)源性小RNA，人工miRNA與shRNA的設(shè)計(jì)原理基本相同，由于miRNA具有內(nèi)源性，因此其更易產(chǎn)生有效的基因沉默。

技術(shù)流程：

dsRNA或pre-miRNA被導(dǎo)入細(xì)胞后，能夠被一種特異的核酸內(nèi)切酶（Dicer）識別并切割成為小片段，這些片段在RNA解旋酶的作用下解鏈。繼之反義鏈在與體內(nèi)一些酶（包括內(nèi)切酶、外切酶、解旋酶等）結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNA-Induced Silencing Complex，RISC），RISC與mRNA同源區(qū)進(jìn)行特異性結(jié)合，若miRNA與mRNA的結(jié)合位點(diǎn)配對，則切割mRNA；若miRNA與mRNA的結(jié)合位點(diǎn)不配對，則抑制mRNA的翻譯。

逆轉(zhuǎn)錄病毒構(gòu)建及包裝 ?

? ? ? 逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus）是一類RNA病毒。在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以病毒RNA為模板合成cDNA再通過DNA、轉(zhuǎn)錄、翻譯等過程形成病毒顆粒。逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)是一種新的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)，由逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、輔助載體（表達(dá)病毒包裝需要的蛋白質(zhì)）和包裝細(xì)胞系組成。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體在外源基因表達(dá)、基因沉默、、生物制藥等得到廣泛的應(yīng)用。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體主要優(yōu)點(diǎn)：轉(zhuǎn)染范圍廣，可以各種細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)入的外源基因可完全融合，對細(xì)胞率高，細(xì)胞不產(chǎn)生病變，可建立細(xì)胞系長期持續(xù)表達(dá)外源基因。

? ? ?逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)共有兩部分組成：包裝細(xì)胞系和缺陷病毒本身。在逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中，去除了正常的蛋白編碼序列而保留了和包裝信號，通過分子技術(shù)將目的基因插入此載體上，而包裝細(xì)胞系能提供病毒載體包裝成病毒粒子所需的結(jié)構(gòu)蛋白。當(dāng)重組病毒載體導(dǎo)入包裝細(xì)胞后，缺陷病毒載體和包裝細(xì)胞的互補(bǔ)作用共同完成病毒裝配，該病毒顆?？善渌拗骷?xì)胞，此時(shí)目的基因進(jìn)入該細(xì)胞并整合到細(xì)胞基因組中，導(dǎo)致插入序列在宿主細(xì)胞中表達(dá)，產(chǎn)生目的蛋白。宿主細(xì)胞不能像包裝細(xì)胞那樣為缺失結(jié)構(gòu)基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒提供結(jié)構(gòu)蛋白，因而在宿主細(xì)胞內(nèi)不會(huì)產(chǎn)生新的毒顆粒，保證了該載體在生物制品領(lǐng)域的生物性問題。

外顯子測序

外顯子組測序（exome-seq）是對定向富集的基因組DNA進(jìn)行高通量測序，它能夠以相對低的費(fèi)用對人類外顯子組進(jìn)行拷問。2009年，外顯子組捕獲工具的出現(xiàn)，讓外顯子組測序這種技術(shù)迅速紅起來。到目前為止，已有超過1萬個(gè)外顯子組被測序。

如今有多家公司推出了外顯子組捕獲試劑，包括羅氏NimbleGen、安捷倫、Illumina，還有現(xiàn)在的華大基因。這些方法究竟孰優(yōu)孰劣，斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)系的研究人員對市場上三個(gè)主流的外顯子組測序平臺進(jìn)行了比較。該研究結(jié)果發(fā)表在《Nature Biotechnology》上。研究人員利用安捷倫、Illumina和NimbleGen的外顯子組測序平臺對同一個(gè)人類血液樣品進(jìn)行分析。他們的結(jié) 果表明，NimbleGen平臺作為一個(gè)使用高密度重疊探針的平臺，盡管覆蓋了較少的基因組區(qū)域，但在靈敏檢測小的變異時(shí)所需的測序量也少。在同樣獲得80M測序數(shù)據(jù)的情況下，RNA共沉淀檢測(RIP)實(shí)驗(yàn)，NimbleGen有97%的目標(biāo)序列達(dá)到10x以上的測序深度，而其他產(chǎn)品只有90%。而安捷倫和Illumina的探針能夠在低密度下捕獲更多數(shù)量的變異。此外，Illumina還捕獲了未翻譯的區(qū)域，這是NimbleGen和安捷倫平臺無法靶定的。研究人員還比較了同一樣品的外顯子組測序和全基因組測序（WGS），顯示外顯子組測序能夠檢測到WGS錯(cuò)過的小變異。

除了文中提到了三個(gè)主流平臺，外顯子組捕獲方面的新產(chǎn)品也在不斷推出，研究人員的選擇也將更廣泛。羅氏NimbleGen即將推出新一代的外顯子液相捕獲產(chǎn)品。這一新產(chǎn)品將可捕獲64M的基因組序列，包括外顯子以及miRNA，它含與其他NimbleGen液相捕獲產(chǎn)品相同的2.1M高密度探針，以高xiao、均一、特異、的定向捕獲。