p細胞實驗介紹流式細胞術(shù)檢測細胞周期和凋亡pp流式細胞術(shù)檢測細胞周期pp細胞周期指細胞從次分裂結(jié)束起到下一次分裂結(jié)束為止的活動過程通常由GG期S期G期和M期組成GG期有絲分裂發(fā)生細胞分裂成兩個細胞進入下一個細胞周期或者進入靜止期G期而G期從DNA含量上無法與G期區(qū)分細胞開始RNA和蛋白質(zhì)的合成但DNA含量仍保持二倍體S期DNA開始合成細胞核內(nèi)DNA的含量介于G期和G期之間G期和M期當(dāng)DNA成為倍體時細胞進入G期G期細胞繼續(xù)合成RNA及蛋白質(zhì)直到進入M期ppPI法是經(jīng)典的周期檢測方法PI為插入性核酸熒光染料能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系用流式細胞儀進行分析就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)從而計算出各個期的百分含量pp一般流程細胞收集-酒精固定過夜-PI染色-流式細胞儀檢測pp細胞凋亡細胞凋亡的早期就有細胞膜表面破損發(fā)生破損時凋亡細胞表面的磷脂腺絲氨酸PS可以從細胞內(nèi)膜翻轉(zhuǎn)至細胞的外膜該過程發(fā)生在之前檢測PS的表達能反映早期凋亡AnnexinV是Ca依賴的磷脂結(jié)合蛋白對PS有很高的親和性并且可以與暴露于細胞外的PS相結(jié)合利用這一原理可以將AnnexinV標(biāo)記熒光來識別早期的細胞凋亡通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶PI來區(qū)分凋亡和壞死細胞PI的膜通透性很差因而只能標(biāo)記壞死的細胞pp一般流程細胞收集-PI-AnnexinV標(biāo)記-流式細胞儀檢測pp結(jié)果示例pbrpbrbrimgsrchttpsdownloadimgdnscnpicp__zs_sypngpp??????????????????圖A細胞周期檢測圖B細胞凋亡檢測圖pdividdiv_zsDIVdivstyle"text-aligncenter"imgstyle"max-width"src"httpsdownloadimgdnscnheropicp__zsjpg"brbrimgstyle"max-width"src"httpsdownloadimgdnscnheropicp__zsjpg"brbrimgstyle"max-width"src"httpsdownloadimgdnscnheropicp__zsjpg"brbrimgstyle"max-width"src"httpsdownloadimgdnscnheropicp__zsjpg"brbrimgstyle"max-width"src"httpsdownloadimgdnscnheropicp__zsjpg"brdivdivbrp細胞傳代培養(yǎng)pp操作步驟pp將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去pp加入--ml胰酶溶液使瓶底細胞都浸入溶液中pp瓶口塞好橡皮塞放在倒置鏡下觀察細胞隨著時間的推移原貼壁的細胞逐漸趨于圓形流式細胞技術(shù)在還未漂起時將胰酶棄去加入m培養(yǎng)液終止消化觀察消化也可以用肉眼當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細zhen孔空隙時終止消化一般室溫消化時間約為--分鐘pp用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液分到另外兩到三瓶中實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞置°C下繼續(xù)培養(yǎng)第二天觀察貼壁生長情況pp附消化液配制方法pp稱取克胰酶蛋白酶活力為加入ml無CaMg的Hanks液溶解細胞增殖實驗濾器過濾chu菌細胞實驗室°C保存用前可在C下回溫胰酶溶液中也可加入EDTA使終濃度達ppbrbrimgsrchttpsdownloadimgdnscnpicp__zspngppbrpbrp透射電鏡觀察可見凋亡細胞表面微絨毛消失核染色質(zhì)固縮邊集常呈新月形核膜皺褶胞質(zhì)緊實細胞器集中胞膜起泡或出芽及凋亡小體和調(diào)亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現(xiàn)象ppbrpp結(jié)果評判調(diào)亡細胞體積變小細胞質(zhì)濃縮調(diào)亡I期pro-apoptosisnuclei的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞宜賓細胞出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象citati的空泡結(jié)構(gòu)IIa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚邊緣化細胞凋亡的晚期細胞核裂解為碎塊產(chǎn)生調(diào)亡小體brbrbrbrbrimgsrchttpsdownloadimgdnscnpicp__zspngppbrppbrppbrpbr宜賓細胞-細胞增殖實驗-英瀚斯推薦商家由
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