實(shí)時(shí)定量pcr-pcr-英瀚斯(查看)

LncRNA芯片

Long non-coding RNAs（lncRNAs）是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過200 nt的功能性非編碼RNA分子。目前的研究已證實(shí)，lncRNA參與X染色體沉默，基因組印記以及染色質(zhì)修飾，轉(zhuǎn)錄ji活，轉(zhuǎn)錄干擾，核內(nèi)運(yùn)輸?shù)榷喾N重要調(diào)控過程。隨著對(duì)lncRNA在哺乳動(dòng)物進(jìn)化及人類疾病發(fā)生和發(fā)展中作用的日益關(guān)注，lncRNA調(diào)控機(jī)制已成為當(dāng)前遺傳學(xué)研究的熱點(diǎn)問題。

篩選出差異表達(dá)的lncRNA是研究其在人類疾病發(fā)生中所扮演角色的基礎(chǔ)。富衡生物為用戶提供高通量的lncRNA芯片進(jìn)行l(wèi)ncRNA表達(dá)譜分析，該芯片基于Agilent的SurePrint技術(shù)生產(chǎn)，實(shí)時(shí)定量pcr，實(shí)驗(yàn)。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

信息覆蓋廣泛：覆蓋了多個(gè)quan威lncRNA數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)布的數(shù)據(jù)；提供人，小鼠，大鼠的lncRNA檢測(cè)。

lncRNA和mRNA同時(shí)檢測(cè)：芯片上包含有的lncRNA和新的mRNA序列檢測(cè)探針。一次芯片實(shí)驗(yàn)可同時(shí)對(duì)lncRNA和mRNA進(jìn)行分析。

平臺(tái)成熟可靠：采用Agilent原位噴墨合成技術(shù)，了高檢測(cè)靈敏度和特異性。

數(shù)據(jù)分析：提供lncRNA和mRNA表達(dá)譜差異分析和功能分析，以及二者的關(guān)聯(lián)分析。

外顯子測(cè)序

外顯子組測(cè)序（exome-seq）是對(duì)定向富集的基因組DNA進(jìn)行高通量測(cè)序，它能夠以相對(duì)低的費(fèi)用對(duì)人類外顯子組進(jìn)行拷問。2009年，外顯子組捕獲工具的出現(xiàn)，讓外顯子組測(cè)序這種技術(shù)迅速紅起來。到目前為止，已有超過1萬個(gè)外顯子組被測(cè)序。

如今有多家公司推出了外顯子組捕獲試劑，包括羅氏NimbleGen、安捷倫、Illumina，還有現(xiàn)在的華大基因。這些方法究竟孰優(yōu)孰劣，斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)系的研究人員對(duì)市場(chǎng)上三個(gè)主流的外顯子組測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行了比較。該研究結(jié)果發(fā)表在《Nature Biotechnology》上。研究人員利用安捷倫、Illumina和NimbleGen的外顯子組測(cè)序平臺(tái)對(duì)同一個(gè)人類血液樣品進(jìn)行分析。他們的結(jié) 果表明，NimbleGen平臺(tái)作為一個(gè)使用高密度重疊探針的平臺(tái)，盡管覆蓋了較少的基因組區(qū)域，但在靈敏檢測(cè)小的變異時(shí)所需的測(cè)序量也少。在同樣獲得80M測(cè)序數(shù)據(jù)的情況下，pcr實(shí)驗(yàn)室，NimbleGen有97%的目標(biāo)序列達(dá)到10x以上的測(cè)序深度，pcr，而其他產(chǎn)品只有90%。而安捷倫和Illumina的探針能夠在低密度下捕獲更多數(shù)量的變異。此外，Illumina還捕獲了未翻譯的區(qū)域，pcr引物設(shè)計(jì)，這是NimbleGen和安捷倫平臺(tái)無法靶定的。研究人員還比較了同一樣品的外顯子組測(cè)序和全基因組測(cè)序（WGS），顯示外顯子組測(cè)序能夠檢測(cè)到WGS錯(cuò)過的小變異。

除了文中提到了三個(gè)主流平臺(tái)，外顯子組捕獲方面的新產(chǎn)品也在不斷推出，研究人員的選擇也將更廣泛。羅氏NimbleGen即將推出新一代的外顯子液相捕獲產(chǎn)品。這一新產(chǎn)品將可捕獲64M的基因組序列，包括外顯子以及miRNA，它含與其他NimbleGen液相捕獲產(chǎn)品相同的2.1M高密度探針，以高xiao、均一、特異、的定向捕獲。

通常活性氧陽(yáng)性對(duì)照在刺激細(xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

收集細(xì)胞后裝載探針：按照1：1000用無培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中，細(xì)胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細(xì)胞充分接觸。用無細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。直接用活性氧陽(yáng)性對(duì)照及自己感興趣的刺激細(xì)胞，或把細(xì)胞等分成若干份后刺激細(xì)胞。通?；钚匝蹶?yáng)性對(duì)照在刺激細(xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

2.、檢測(cè)

對(duì)于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計(jì)、熒光或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

對(duì)于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計(jì)、熒光或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。